怎么理解荧光定量pcr的溶解曲线

荧光定量pcr的溶解曲线理解：用Syber Green方法做完PCR后，用来判断产物是否相对专一。应结束后，逐渐加温。和Syber
Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和Syber
Green结合。

一般每加温一度，读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时，产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧光信号的变化，开始加热，信号变化不大，所以几乎是平的。

接近Tm时，突然变化加大，所以出现峰值。再升温，产物全部解离，就又是一条直线了。如果有非特异性产物，在加热过程中就会出现一些比较矮，宽的峰。

扩展资料：

荧光定量pcr通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中，对全程PCR扩增过程进行实时检测。

根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号标准偏差的10倍。

熔解曲线分析可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。熔解温度上有一特征峰（Tm，DNA双链解链50%的温度），用这个特征峰就可以将特异产物与其它产物如引物二聚体区分开，因为它们在不同的温度熔解线，随着反应中双链DNA变性。

参考资料来源：百度百科-荧光定量PCR

参考资料来源：百度百科-溶解曲线

这个一般是用SYBY Green作为荧光染料的时候需要做的工作！
因为SYBY Green染料是非特异的染料，只要有扩增，染料就可以镶嵌在双链中发出荧光。我们做溶解曲线是为了观察我们扩增发出荧光的片段是不是我们需要的产物。如果溶解曲线做出来只有单峰，且出锋位置是你的退火温度，那么这个是你的产物发出的荧光，实验结果有效。如果出现多锋或退火温度不对，那么这个实验结果是不可信的！你需要再次调整！