如何用乙醇沉淀法浓缩质粒DNA

2025-04-03 17:51:17
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用乙醇沉淀法浓缩质粒DNA:

  1. 提取液中加入等体积预冷的5mol/L Licl 充分混匀,1000rpm 4℃离心15min,取上清。

  2. 加等体积异丙醇,混匀,室温放置10min,10000rpm 4℃离心15min。

  3. 弃上清,纯点加入70%乙醇洗涤一次,沉淀风干10~15min。

  4. 500ul,含RNA酶的TE(pH8.0)溶解沉淀,室温放置30min。(将质粒RNaesA混合物用酚:氯仿抽提一次,然后用氯仿抽提一次)

  5. 用2.5倍体积无水乙醇沉淀质粒,风干10min。

  6. 加1ml灭菌水溶解沉淀,加500ul PEG-MgCl2溶液,充分混合,室温10min,12000rpm 4℃离心15min。

  7. 用70%乙醇重悬沉淀,12000rpm 4℃离心15min。

  8. 弃上清,沉淀用70%乙醇处理一次,最后将质粒,溶于500ulTE(pH8.0)中,取1ul质粒DNA,100倍稀释后测OD260,计算DNA的浓度,其余封装,-20℃保存备用。