一般都会在表达蛋白前面加入序列标签，一般都是组氨酸标签，便于后续的蛋白纯化。但是不要加的太长了，还有就是多出的碱基一定要是3个3个一组的，不能打破了你的蛋白的开放阅读框。多出几个残基对蛋白的影响不会太大，基本可以忽略。这个就要看你的启动子序列之后有没有ATG，如果没有的话就需要加入，有的话就不需要。
首先，这个问题存在逻辑颠倒的毛玻 酶切位点的选择一定是要避开目标片段内包含的位点，因为如果不避开到时候酶切就会把目的片段切开。在目的片段和载体之间的酶切位点都是扩增引物带入的。
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