感受态细胞大肠杆菌的培养所用的培养基,含什么成分

2025-03-26 16:53:57
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回答1:

(1)挑取大肠杆菌单菌落,接种于5
ml无抗生素的LB液体培养基中,37℃下振荡培养13h,至对数生长后期。将该菌悬液以1:50
的比例接种于100
ml
LB
液体培养基中,37℃振荡培养2-3h至OD600=0.5。
(2)在无菌条件下将培养液转入离心管中,冰上放置10
min,使培养物冷却至0℃,然后4℃,4000rpm离心10min;
(3)弃去上清,倒置1
min,以便将培养液流尽;
(4)用冰预冷的0.1
mol/L的CaCl2溶液10
ml轻轻悬浮细胞,充分混匀,冰上放置30
min后,4℃下4000rpm离心10min;
(5)弃去上清,并倒置1
min,以便最后的痕量培养液流尽;
(6)加入4
ml预冷含15%甘油的0.1
mol/L的CaCl2溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成感受态细胞悬液;
(7)感受态细胞100
μL分装,贮存于-70
℃保存备用。

回答2:

因为感受态细胞本来就不具备抗性。
后期用载体质粒转化感受态细胞时,我们就是根据
转化成功的大肠杆菌(载体质粒进入该感受态细胞)能在含抗生素的培养基上生长
而转化不成功(载体质粒没有进入感受态细胞)的感受态细胞则由于没有抗性而不能生长
这一原理来判断是否转化成功。