Bicinchoninic acid (BCA )法是近来广为应用的蛋白定量方法。其原理与Lowery法蛋白定量相似,即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物,在562 nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比,据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比,BCA蛋白测定方法灵敏度高,操作简单,试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳,并且受干扰物质影响小。与Bradford法相比,BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
器材
1. 7220型分光光度计
2. 比色杯
3. 恒温水浴箱
4. 中试管7支
5. 枪式移液管
试剂
1. 试剂A: 1%BCA二钠盐
2%无水碳酸钠
0.16%酒石酸钠
0.4%氢氧化钠
0.95%碳酸氢钠
混合调PH值至11.25。
2. 试剂B:4%硫酸铜。
3. CA工作液:试剂A?100ml?+?试剂B?2ml混合。
4. 蛋白质标准液:用结晶牛血清白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成1.5mg/ml的蛋白质标准液。(纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定)
5. 待测样品:用双缩脲测定法的样品稀释而成。
具体可参照
http://www.51protocol.com/pro/base1/20071106/39210.html