冻干菌株复苏注意事项:
将冻干菌种管外壁用碘酒擦洗消毒、稍干,用75% 乙醇棉擦净,待干;
无菌操作打开包装;
用无菌吸管将菌种复苏液体培养基约0.3ml左右注入被启开的菌种瓶中并吹打,使瓶中的冻干菌种溶解成菌悬液;
将上述菌悬液吸出,分别接种到非选择性固体斜面或平板如:血平板和菌种复苏培养基中,一般放置在37℃培养箱培养18~24h。对需要特殊培养条件的细菌,如需5%~10%二氧化碳或厌氧条件等,应分别于二氧化碳培养箱或厌氧培养箱中培养;
次日取出培养物,仔细观察菌苔(落)形态、有无杂菌生长、并进行涂片染色镜检,若无异常,转种1~2代后可使用;
如菌种未生长,应继续培养至72h;
如发现培养物生长不良或不纯,可用选择性培养基进行平板分离单个菌落后再传代。不同的细菌对冷冻干燥的抵抗能力不同,弧菌对冷冻干燥的抵抗能力相对较弱,在冷冻干燥过程中菌体细胞容易受伤。因此复苏时应根据其生长特性,选用碱性蛋白胨水(霍乱弧菌)或3%氯化钠碱性蛋白胨水(副溶血性弧菌、创伤弧菌)为复苏培养基,待菌体细胞修复后再接种于适合弧菌生长的非选择性培养基上培养。