A、限制酶具有特异性，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，A错误；B、DNA连接酶和运载体是构建重组质粒必需的工具，其中DNA连接酶属于工具酶，而运载体不属于工具酶，B错误；C、质粒是广泛存在于细菌细胞质中的一种环状DNA分子，不属于细胞器，C错误；D、目的基因和受体细胞均可来自动物、植物或微生物，D正确．故选：D．
